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qPCR實驗:0.1 ml PCR 12聯(lián)管配熒光定量光學平蓋
更新時間:2025-09-10瀏覽:254次

  qPCR實驗:0.1 ml PCR 12聯(lián)管配熒光定量光學平蓋

  這是一種專為實時熒光定量PCR(qPCR)實驗設計的關鍵耗材,其核心目的是在qPCR儀中進行熒光信號采集時,實現(xiàn)高通量、低成本且可靠的檢測。

  以下是詳細的介紹:

  一、是什么?

  這是一種通常由高透光的聚丙烯(PP)或聚酯薄膜制成的薄片狀蓋膜。它的一面涂有特殊的光學透明膠,另一面是超平滑的光學表面。

  匹配性:它專為12聯(lián)管(也稱為12排管) 設計,尺寸匹配標準96孔板規(guī)格(SBS標準)的12聯(lián)管架子。

  功能:通過壓敏膠,將其緊密地粘貼在12聯(lián)管的管口上,形成一個光學平整的密封表面,并防止PCR過程中試劑的蒸發(fā)和交叉污染。

  二、主要特點與優(yōu)勢

  優(yōu)異的光學透性:

  蓋膜具有的透光率,特別是在qPCR常用的熒光波長范圍內(如FAM, VIC, ROX, Cy5等),確保熒光信號能被儀器光學檢測系統(tǒng)準確、高效地捕獲,保證數(shù)據(jù)的精確性。


0.2ml PCR十二聯(lián)管 透明.png


  光學平整表面:

  “平蓋"意味著其表面非常平整。這在qPCR中至關重要,因為儀器的光學鏡頭在掃描時,其焦距是固定的。一個平整的蓋膜表面確保了每個孔到鏡頭的距離一致,避免了因高度差導致的信號聚焦不準和信號衰減,從而保證了孔間數(shù)據(jù)的可比性和重復性。

  密封防蒸發(fā):

  背面的壓敏膠能形成牢固的密封,有效防止PCR過程中高溫導致的水分蒸發(fā)。試劑蒸發(fā)會顯著改變反應體系的濃度,導致實驗失敗(如Ct值不準、反應效率低下等)。

  高通量與低成本:

  這是其相對于單個硬質穹頂蓋。使用硬質蓋帽需要逐個手動或使用壓蓋器扣蓋,非常耗時耗力。而光學平蓋可以一次性密封整排12個或整個96孔板,極大地提高了工作效率,特別適合大批量樣本檢測。

  成本通常遠低于購買96個獨立的硬質蓋帽。

  防交叉污染:

  良好的密封性也避免了氣溶膠的溢出,防止了孔與孔之間的交叉污染。

  三、適用場景

  高通量熒光定量PCR實驗:如基因表達分析(RT-qPCR)、病原體檢測、SNP分型等所有需要用到96孔板格式qPCR的實驗。

  使用標準12聯(lián)管(0.1 ml)和96孔板支架的各類qPCR儀,例如:

  Applied Biosystems (ABI) 7500/7500 Fast, StepOnePlus, ViiA 7

  QuantStudio 3/5/6/7 Pro

  Bio-Rad CFX96, CFX Opus系列

  Roche LightCycler 480

  Eppendorf Mastercycler ep realplex

  以及其他兼容96孔板的qPCR儀。

  四、如何使用?

  準備:將反應體系加入0.1 ml的12聯(lián)管中,并將聯(lián)管放入對應的96孔板架子上。

  撕取:從保護底紙上取下一張光學平蓋(通常為8聯(lián)排或12聯(lián)排的預切割蓋膜)。

  覆蓋:將蓋膜有膠的一面朝下,仔細對齊管架的上緣,輕輕放下。

  壓緊:使用提供的壓板工具或實驗室常用的平板刮板,用力、均勻地刮壓蓋膜表面,確保每個管口都與蓋膜密封,沒有氣泡和褶皺。

  檢測:將密封好的整個板架放入qPCR儀中進行擴增和熒光采集。

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  五、選擇注意事項

  兼容性:務必確認光學平蓋與您實驗室的qPCR儀型號兼容。不同儀器的光學系統(tǒng)設計可能對蓋子的透光率和厚度有特定要求。

  粘合劑:優(yōu)質的粘合劑應能在PCR熱循環(huán)的高溫(通常最高105°C)下保持粘性,不會熔化、溢出或殘留難以清理的膠漬。

  無核酸酶/無酶:確保產品經(jīng)過認證,無核酸酶和無DNA/RNA酶污染,這對于敏感的qPCR實驗至關重要。

  無熒光干擾:蓋膜自身不應產生自發(fā)熒光,以免干擾熒光信號的采集,造成背景值過高。

  注:以上資料僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),如需具體產品資料請咨詢技術老師或品牌商。

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