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犬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發(fā)布時間:2025/8/29瀏覽:163次
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  犬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  本生犬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒實驗使用說明書,包含操作流程、注意事項及關(guān)鍵參數(shù)說明。

  一、試劑盒組成

  預(yù)包被酶標(biāo)板:96孔/48孔,已包被抗IFN-α抗體

  標(biāo)準(zhǔn)品:凍干粉,需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)配(梯度稀釋范圍:15.6-1000 ng/mL)

  檢測抗體:生物素化抗IFN-α抗體(100×濃縮液)

  顯色系統(tǒng):TMB底物A/B液(避光保存)、終止液(2M H?SO?)

  其他:20×濃縮洗滌液、封板膜、說明書

  二、實驗操作流程

  1. 樣本準(zhǔn)備

  血清/血漿:采集后離心(3000 rpm, 10 min),避免溶血,2-8℃保存≤48小時,長期保存需-20℃/-80℃(避免反復(fù)凍融)

  組織/細(xì)胞上清:離心去沉淀,蛋白定量后稀釋至檢測范圍內(nèi)^^2^^

  2. 洗滌液配置

  按1:19比例用蒸餾水稀釋濃縮洗滌液(如1mL濃縮液+19mL水),現(xiàn)配現(xiàn)用^^1^^2^^

  3. 檢測步驟

  步驟操作要點時間/溫度

  加樣標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL/孔,空白孔加稀釋液37℃ 90min

  洗滌甩干后每孔加350μL洗滌液,重復(fù)3次,拍干室溫

  加抗體每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋)37℃ 60min

  加酶標(biāo)物每孔加100μL SABC復(fù)合物37℃ 30min

  顯色每孔加90μL TMB底物(避光)37℃ 15min

  終止每孔加50μL終止液立即讀數(shù)

  三、關(guān)鍵注意事項

  安全防護(hù):

  終止液具腐蝕性,需戴手套操作;避免底物B接觸皮膚

  實驗區(qū)禁止飲食,使用一次性吸頭防止交叉污染

  操作規(guī)范:

  加樣順序一致,確保溫育時間誤差≤5分鐘

  顯色后10分鐘內(nèi)測定OD值(450nm波長)

  數(shù)據(jù)解析:

  標(biāo)準(zhǔn)曲線R2需≥0.99,樣本濃度超出范圍需重新稀釋

  四、常見問題處理

  高背景值:檢查洗滌是否凈,避免吸水紙殘留液體

  顯色異常:確認(rèn)TMB底物是否避光保存,終止液是否按比例添加

  標(biāo)準(zhǔn)曲線偏差:復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品時需充分渦旋混勻

  注:以上資料僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),如需其他請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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